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電化學(xué)發(fā)光反應(yīng)的步驟
點擊次數(shù):2731 更新時間:2023-05-24
電化學(xué)發(fā)光反應(yīng):電化學(xué)發(fā)光(electro-chemiluminescence,ECL)是一種在電極表面由電化學(xué)引發(fā)的特異性化學(xué)發(fā)光反應(yīng),實際上包括了電化學(xué)和化學(xué)發(fā)光兩個過程?;瘜W(xué)發(fā)光劑三聯(lián)吡啶釕[Ru(bpy)3]2和電子供體三丙胺(TPA)在陽電極表面同時各失去一個電子發(fā)生氧化反應(yīng)。二價的[Ru(bpy)3]2+被氧化成三價,后者是一種強氧化劑。TPA被氧化成陽離子自由基TPA+*,后者很不穩(wěn)定,自發(fā)地失去一個質(zhì)子(H+),形成自由基TPA*,這是一種非常強的還原劑。這兩個高反應(yīng)基團在電極表面迅速反應(yīng),三價的[Ru(bpy)3]3+被還原形成激發(fā)態(tài)的二價[Ru(bpy)3]2+*,能量來源于[Ru(bpy)3]3+和TPA*之間存在的高電化學(xué)電位差。TPA*自身被氧化成二丙胺和丙醛。接著激發(fā)態(tài)的   [Ru(bpy)3]2+*衰減成基態(tài)的[Ru(bpy)3]2+,同時發(fā)射一個波長620nm的光子。這一過程在電極表面周而復(fù)始地進行,產(chǎn)生許多光子,使光信號得以增強。
電化學(xué)發(fā)光反應(yīng)的步驟:
(1)將試管內(nèi)兩步反應(yīng)結(jié)束的反應(yīng)液輸入流動池,由于磁鐵吸引,磁性微粒被吸著在電極上,其余反應(yīng)物流出流動池,完成游離的和結(jié)合的標(biāo)記抗體的分離。
(2)將TPA溶液送入流動池,將殘余的游離標(biāo)記抗體排出流動池,在流動池中充滿TPA溶液。
(3)撤下磁鐵,電極上通電,三聯(lián)吡啶釕與TPA發(fā)生電化學(xué)發(fā)光反應(yīng),發(fā)出的光被光電倍增管收集,測定光強度。
(4)通過換算得出待測標(biāo)本中的抗原濃度。
(5)在流動池中送入清洗液,將反應(yīng)物沖洗,即可測定下一個標(biāo)本。
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